河魨毒生產菌之16S rDNA基因與蛋白質圖譜資料建立

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Title:	河魨毒生產菌之16S rDNA基因與蛋白質圖譜資料建立
Authors:	陳弘軒
Contributors:	保健營養生技學系
Keywords:	河魨毒生產菌;16S rDNA;SDS-PAGE
Date:	2015
Issue Date:	2015-10-14 02:22:04 (UTC+0)
Publisher:	亞洲大學
Abstract:	河魨毒 (Tetrodotoxin, TTX) 是一種低分子量的非蛋白質神經毒素，體內含有TTX的生物，其毒素來源根據前人研究結果，以攝食積累之外因說較為廣泛採納。TTX的相關研究，以探討含有TTX的生物，其TTX生產菌之種別鑑定、產毒能力強弱、宿主與TTX生產菌之相關性、TTX之醫學應用等類別為大宗，探討產毒菌之可能毒性片段、以蛋白質圖譜分析等方法數量較少，因此可產TTX與其相關衍生物之細菌，其菌體與毒素之關聯性，具有深入探討之價值。隨著分子生物技術進步， 16S rDNA常用於菌種分析，故本論文以16S rDNA為目標片段，使用在不同菌種仍具有高通用性之8F與U1492R引子對，透過聚合酶鏈鎖反應 (Polymerase Chain Reaction, PCR) 增幅菌株之16S rDNA片段，根據實驗結果顯示，成功建立11株產毒菌與20株非產毒菌之16S rDNA序列資料，各序列片段均已提出申請並收錄於NCBI之基因序列資料庫。後續探討產毒菌之特異性基因片段，顯示產毒菌與非產毒菌之16S rDNA具有高一致性，序列差異度最大之區間，序列組成亦隨菌種而異，推測其落差來自於細菌間種屬不同所致，顯示TTX生產菌特異性片段不存在於16S rDNA，僅以16S rDNA無法作為產毒菌與非產毒菌之鑑別依據。除基因型分析法外，蛋白質分析法也廣泛應用於鑑別菌種、探討生理生化之功能性，本論文透過萃取菌體總蛋白質，根據SDS-PAGE蛋白質圖譜呈現之差異，以探討TTX生產菌之特異性產毒相關蛋白，利用2株高產毒菌、5株弱產毒菌、3株非產毒菌，成功建立10株菌株之SDS-PAGE蛋白質圖譜，根據比對結果顯示，高產毒菌株之120.0、41.1 kDa片段具有特異性，推測可能是產毒菌之特異性蛋白質。
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