鑑別番茄環斑病毒單株抗體之製備

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Title:	鑑別番茄環斑病毒單株抗體之製備
Authors:	陳郁涵
Contributors:	生物科技學系
Keywords:	番茄斑萎病毒屬;番茄環斑病毒;單株抗體
Date:	2015
Issue Date:	2015-09-30 08:06:50 (UTC+0)
Publisher:	亞洲大學
Abstract:	番茄斑萎病毒屬 (Tospovirus) 為Bunyaviridae的一屬，病毒顆粒大小約為80-120 nm，內含三條單股基因體RNA片段，依其大小分別命名為S、M和L，依據S RNA所表現之核鞘蛋白 (nucleocapsid protein，NP) 的血清學與親緣演化關係，現行已知有28種Tospovirus屬病毒。番茄環斑病毒 (Tomato zonate spot virus，TZSV) 為Tospovirus屬之一員，首次於2005年在中國雲南省的番茄與辣椒上發現，造成果實上有同心圓的環紋斑點及葉部有壞疽病斑之病徵。TZSV與彩色海芋黃化斑點病毒 (Calla lily chlorotic spot virus，CCSV) 和番茄壞疽斑點病毒 (Tomato necrotic spot virus，TNSV) 在核鞘蛋白親緣關係上分別具有80.9%和81.7%高度的胺基酸相同性 (identity)。CCSV首次於2000年在台灣發現，而TNSV則為新報導的tospovirus，於2009年在中國貴州省發現。使用先前針對CCSV的核鞘蛋白所生產的單株抗體 (MAb-CCSV-N) 可與TZSV在間接酵素連結免疫吸附反應 (indirect enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 和西方墨點法 (western blotting) 的反應中產生血清反應，因而此抗體無法用於區分CCSV與TZSV。為了開發一種可快速並精確鑑定TZSV的工具，利用pET細菌表達系統表現TZSV的核鞘蛋白做為免疫原所製備之單株抗體MAb-TZSV-S18D7H2對TZSV具有高度的特異性，可用於鑑別TZSV與CCSV。抗原決定基的分析結果顯示，MAb-TZSV-S18D7H2的目標抗原決定基位於核鞘蛋白第77-86個胺基酸的區域 (GHKIVASGAD)。此外，針對TZSV與CCSV設計特異性引子對，可混合使用於multiplex RT-PCR以同時檢測TZSV與CCSV。我們所開發的高效能檢測系統，包含血清學與multiplex RT-PCR檢測方法，對於國外TZSV和國內CCSV之防檢疫工作極具價值。
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