台灣常見貝類及其加工品基因鑑定技術開發之探討

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Title:	台灣常見貝類及其加工品基因鑑定技術開發之探討
Authors:	張冠霖
Contributors:	保健營養生技學系
Keywords:	貝類
Date:	2014-07-31
Issue Date:	2014-09-03 07:02:50 (UTC+0)
Publisher:	Asia University
Abstract:	貝類是台灣重要的漁獲資源，在利用時，多經過去除外殼等外部特徵，在經過一連串後續加工程序或貯藏，如:冷藏、冷凍與加熱等步驟，由於可供辨識的外部特徵消失，因此需利用其他方法來鑑定貝類物種。由於加工過程劇烈，造成蛋白質裂解，因此，蛋白質分析方法較難應用在加工品貝類物種鑑定上，故本實驗選用基因技術來鑑定貝類物種，而儲藏與加工時間及程度的差異皆會影響基因序列的完整性，進而影響到基因鑑定貝類物種的成功與否，故鑑定加工之物種時需先觀察其DNA裂解情形，選用合適的長度的目標基因進行引子設計，再搭配相關的基因方法，以辨別貝類物種；台灣沿海養殖及捕獲的貝類包括有馬蹄蛤(Geloina erosa)、黃金蜆(Corbicula fluminea)、文蛤(Meretrix lusoria)、環文蛤(Cyclina sinensis)、蝦夷扇貝(Mizuhopecten yessoensis)、毛蟶(Sinonovacula constricta)、菲律賓簾蛤(Ruditapes philippinarum)、綠殼菜蛤(Perna viridis)、海瓜子(Ruditapes philippinarum)、蚵仔(Crassostrea gigas)、花蛤(Gomphina aequilatera)等。本研究首先建立11種貝類完整之COI基因組序列和9種貝類完整之Cyt b完整基因序列，其片段分別為1,740 bp、1,445 bp，再利用所建立之資料搜尋貝類物種合適之基因片段，作為物種鑑定引子設計之參考依據。再者，利用所建立COI基因資料設計一組共同且具專一性之引子COI-F/R，其所增幅之片段長度為460 bp，利用此組引子進行生鮮貝類與加工貝類產品進行PCR-RFLP物種鑑定技術開發，利用限制酶BsaJI、HaeIII、BmrI、MslI、NlaIII共五種限制酶，可成功區別十一種貝類。由於市售產品之DNA會因加熱高溫烹煮、混雜其它之貝類會影響DNA之完整性。針對仿製蜆精、馬蹄蛤精和蠔精本實驗開發multiplex-PCR利用引子Geloina-F/R、Gigas-F/R、Corbicula-F/R分別成功增幅出片段長度為183 bp、122 bp、256 bp；仿製干貝醬的部分利用Cyt b基因組設計特異性引子yessoensis-F/R可成功增幅出片段長度為320 bp。根據上述仿製實驗檢測，證明開發之PCR-RFLP與multiplex-PCR技術方法的可用性，實際採集台灣北、中、南、東四個地區之市售貝類樣品:蠔蜆精(錠)33件、干貝醬24件。經基因檢測原料結果顯示蠔蜆精(錠)於中部有1件不符合標示之產品，而干貝醬的部分檢出率則為29.1%。
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