Stenotrophomonas maltophilia乙內醯胺?L2 基因之選殖與分析

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Title:	Stenotrophomonas maltophilia乙內醯胺?L2 基因之選殖與分析 Characterization of β-lactamase (L2) gene in Stenotrophomonas maltophilia
Authors:	鄭善恩
Contributors:	生物科技學系碩士班
Date:	2006
Issue Date:	2009-10-13 06:35:25 (UTC+0)
Publisher:	亞洲大學
Abstract:	Stenotrophomonas maltophilia 為多重抗藥性的細菌，其位於染色體上的 L1, L2 二基因可產生高活性 β-lactamase 可水解 β-lactam 類的抗生素。本實驗菌株來源為醫院細菌檢驗室所提供，共收集 22 株臨床分離株。S. maltophilia 的 L2 為高變異性的基因，所以為更進一步了解 L2 基因的高變異性跟菌株間的關係，以PCR的方法選殖定序22株菌株L2序列。分析發現在 22 株菌株中的 L2 基因經演化分析可分成 I, Ⅱ 兩個 group，而 I group 又分成了 Ia, Ib, Ic, Id 及 Ie 5個 subgroup ，Ⅱ group 也分成了 Ⅱa, Ⅱb 及 Ⅱc 3 個 subgroup，I, Ⅱ 兩個 group 的相同度只有74％。為了解L2 基因演化的分型在抗藥性上是否有所差異，我們以E. coli DH5(pOKXL2Xhol)菌株，利用抗生素感受性試驗的方法，觀察在 E. coli DH5α 菌株中 L2 蛋白的抗藥性表現情形。其結果不如預期，L2 蛋白在E. coli DH5α菌株中並沒有明顯表現。位於L2基因上游的ampR基因，其功能為調控下游的β-lactamase基因，推測此ampR基因可能與L2基因可能有所關聯性。所以我們定序了 4 株菌株的 ampR-L2 基因(菌株 ATCC13637, M1, M2, H1 )，菌株H1為 L2 基因分型的Ⅱa subgroup，另外3株為Ia subgroup ，在分析ampR序列時發現與L2相鄰的ampR並沒有與L2演化上的分型有關聯，但在兩基因間的 intergenic region 序列分析上，發現 H1 菌株的L2 promoter 區域和 intergenic region 序列相同度上與其它3株不同，所以推論 ampR, L2 基因間的intergenic region可能與 L2 基因演化分型有關。接著一樣以E. coli DH5α(pOKXAmpRL2)菌株，試了解AmpR對L2的作用，在觀察抗生素感受性的結果中，發現結果差異並不明顯。為了測試不同 E. coli 寄主細胞對 ampR-L2 中 L2 活性表現的影響。所以我們再以 E. coli Top10 及 E. coli W3110 兩菌株為宿主細胞，觀察E. coli Top10(pOKXAmpRL2), E. coli W3110(pOKXAmpRL2) 對抗藥性的影響，其結果也不如預期，但在針對E. coli DH5α(pOKXAmpRL2) 更進一步的 β-lactamase 活性測試中，發現有兩株菌的β-lactamase有較明顯的差異，但活性仍不高。
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