?米顆?在日本腦炎病毒偵測的應用

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題名:	?米顆?在日本腦炎病毒偵測的應用 The application of nanoparticles on the detection of Japanese encephalitis virus
作者:	蔡明宏
貢獻者:	生物資訊學系碩士班
日期:	2007
上傳時間:	2009-10-12 10:35:11 (UTC+0)
出版者:	亞洲大學
摘要:	目前臨床診斷日本腦炎病毒感染的方法，主要是即時定量反轉錄-聚合酶連鎖反應（Real time RT-PCR）及IgM及IgG抗體檢驗（Capture IgM and IgG ELISA）二種。先前的研究指出，利用奈米金微粒優異的熱傳導特性，進而提升聚合酶連鎖反應（polymerase chain reaction, PCR）的效能，而量子點（quantum dots）也被應用在分子影像疾病診斷。本研究的目的在於應用奈米金微粒與量子點提升日本腦炎病毒感染之分子及免疫診斷的效能。奈米金微粒應用於偵測低濃度日本腦炎病毒套膜蛋白基因如1.5×10-4 -1.5 fg/ml質體或0.02-200 ng/ml cDNA混合物，聚合酶連鎖反應結果顯示，在反應試劑中加入5nM或10nM奈米金微粒時，反應循環數為25 個循環即有明顯陽性反應，而未加奈米金微粒則反應循環數需達35 個循環才有明顯陽性反應。以35 個循環結果為例，加入5nM或10nM奈米金微粒時，反轉錄-聚合酶連鎖反應之敏感度有效提升一百倍以上。即時定量聚合酶連鎖反應的結果，5nM奈米金微粒將敏感度提升5.39-7.08 個循環，而10nM奈米金微粒將敏感度提升7.06-8.17 個循環。在反轉錄-即時定量聚合酶連鎖反應的部份，5nM奈米金微粒將敏感度提升2.77-5.39 個循環，而10nM奈米金微粒將敏感度提升3.95-6.18 個循環。此外，我們利用噬菌體抗體表現系統篩選出對日本腦炎套膜蛋白具有專一性抗體，再用奈米金微粒接合噬菌體抗體，用來發展日本腦炎病毒的免疫診斷方法。最後，將量子點接合噬菌體抗體應用在日本腦炎病毒感染活體之分子與細胞影像偵測系統。
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