開發台灣產毒蟹粗糙蝕菱蟹 (Daldorfia horrida)、繡花脊熟若蟹 (Lophozozymus pictor) 基因探針及基因改造黃豆、玉米之 Real-Time PCR定性檢測法之探討

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Title:	開發台灣產毒蟹粗糙蝕菱蟹 (Daldorfia horrida)、繡花脊熟若蟹 (Lophozozymus pictor) 基因探針及基因改造黃豆、玉米之 Real-Time PCR定性檢測法之探討
Authors:	邱奕鈞
Contributors:	保健營養生技學系
Keywords:	粗糙蝕菱蟹;繡花脊熟若蟹;基因改造食品;聚合酶連鎖反應;鐵克曼探針
Date:	2016
Issue Date:	2016-08-12 07:36:36 (UTC+0)
Publisher:	亞洲大學
Abstract:	本論文探討台灣十種經濟蟹類和有毒螃蟹繡花脊熟若蟹 (Lophozozymus pictor) 與粗糙蝕菱蟹 (Daldorfia horrida) 於加工食品摻雜時的檢測方法，並因應亞洲大學食品安全檢驗中心的成立，利用檢驗中心購買之行政院衛生福利部公告之 19 組基因改造黃豆、玉米引子對及探針，進行基因改造成分定性檢驗。首先以螃蟹通用性引子擴增出粒線體 DNA 之 Cytochrome b (Cyt b) 基因序列，並利用國家衛生研究院 GCG 及 MEGA6.0 分析軟體對台灣十種經濟蟹類進行 Cyt b 基因序列之分析比對。從比對結果的 750 個鹼基 (base pair；bp)中分別設計種特異性引子對與探針，其增幅片段長度為 86 bp、83 bp (含引子)，並進行引子對與探針專一性及靈敏度之試驗。結果證明引子對與探針對其它蟹種均無增幅及螢光反應，且DNA濃度之靈敏度檢測極限分別為10-3 ng/μL 及 10-2 ng/μL。並利用上述之檢測條件針對市售調味螃蟹加工製品與本實驗室利用 L. Picto及D. horrida 蟹種製作仿市售產品進行測試，以及滅菌時間長短 (autoclave at 121°C/80 min-120 min)試驗，結果顯示此即時定量檢測條件及探針可適用於鑑別 L. Pictor及D. horrida 蟹種製成的加工品及原物料。另外測試國家衛生福利部所公告之 19 組基因改造黃豆、玉米引子對及探針，並進行TAF樣品實際檢測。結果顯示，19組引子對及探針具極高專一性，對於檢測有添加基因改造黃豆、玉米的基因改造食品具有鑑別效果。綜合上述，本篇論文成功開發鑑別 L. Pictor及D. horrida 蟹種即時定量基因探針，可實際應用在摻雜 L. Pictor及D. horrida 之加工食品的蟹種鑑別。並對衛生福利部所提供的 19 組基因改造黃豆、玉米之即時定性探針與引子對完成實際測試。
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